分光光度法的使用使用始于牛頓，1665年牛頓做了一個試驗：他讓太陽光透過暗室窗上的小圓孔，在室內(nèi)形成很細的太陽光束，該光束經(jīng)棱鏡色散后，在墻壁上呈現(xiàn)紅、橙、黃、綠、藍、靛、紫的色帶。這色帶就稱為“光譜”。牛頓通過這個實驗，揭示了太陽光是復合光的事實。1815年夫瑯和費仔細觀察了太陽光譜，發(fā)現(xiàn)太陽光譜中有600多條暗線，并且對主要的8條暗線標以A、B、C、D、E、F、G、H符號。這是人們zui早知道的吸收光譜線，被稱為“夫瑯和費線”，但當時對這些線還不能做出正確的解釋。1859年本森和基爾霍夫發(fā)現(xiàn)由食鹽發(fā)出的黃色譜線的波長和“夫瑯和費線”中的D線波長*一致，才知道一種物質(zhì)所發(fā)射的波長（或頻率），與它所能吸收的波長（或頻率）是一致的。1862年密勒應用石英攝譜儀測定了100多種物質(zhì)的紫外吸收光譜。他把光譜圖表從可見區(qū)拓展到了紫外區(qū)，并指出吸收光譜不僅與組成物質(zhì)的基因有關，而且與分子和原子的性質(zhì)有關。此后，哈托萊和貝利等人又研究了各種溶液對不同波段的截止波長。并發(fā)現(xiàn)與吸收光譜相似的有機物，它們的結(jié)構(gòu)也相似。并且可以解釋用化學方法所不能說明的分子結(jié)構(gòu)問題，初步建立了分光光度法的理論基礎，以此推動了分光光度計的發(fā)展。1918年美國國家標準局研制成了世界上*臺紫外可見分光光度計，此后，分光光度計得到了發(fā)展，并且很快在各個領域的分析工作中得到了應用。1760年瑯伯發(fā)現(xiàn)物質(zhì)對光的吸收與物質(zhì)的厚度成正比，后被人們稱之為瑯伯定律；1852年比爾發(fā)現(xiàn)物質(zhì)對光的吸收與物質(zhì)的濃度成正比，后被人們稱之為比爾定律。在應用的過程中，人們把瑯伯定律和比爾定律結(jié)合起來，稱之為瑯伯-比爾定律，從此之后人們開始重視物質(zhì)對光的吸收，并在對物質(zhì)的定性和定量的分析中使用，很多的科學家在瑯伯-比爾定律的基礎上研制了很多用于分析的儀器，其中就包含“紫外可見分光光度計”。1945年美國Beackman公司推出了世界上*臺成熟的紫外可見分光光度計，并開始向市場推廣，隨后紫外可見分光光度計開始得到了飛速的發(fā)展。